米兰网页版和数明小讲(jiǎng)堂 | 新冠(guàn)核酸检(jiǎn)测之PCR技(jì)术
疫情防控
科学防疫 米兰网页版和数明(míng)有“芯”
当前(qián)上海正处于(yú)抗新型(xíng)冠状病毒肺炎疫情(qíng)防控的关键阶(jiē)段,在这个(gè)没(méi)有硝烟的(de)战场上,及(jí)时快速地筛(shāi)查新冠感染者并(bìng)及时(shí)进行隔(gé)离(lí)是阻止新冠(guàn)病毒肆意蔓延(yán)的最有(yǒu)效且唯一的手段。核酸检测(cè)是目前筛查新冠感染者最(zuì)精(jīng)准、有效、低成(chéng)本(běn)的技术方式。
什么是PCR?
聚(jù)合(hé)酶链式反应(Polymerase Chain Reaction), 简称PCR, 又称多(duō)聚酶链式反应(yīng),是一(yī)项利(lì)用DNA双链复制的原理,在生物体外复(fù)制特定DNA片段的核酸合(hé)成(chéng)技术。透过这项技术,可(kě)在短(duǎn)时间内(nèi)大量扩增目的基因(yīn),而(ér)不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物(wù)体。
PCR扩增的三个基本步骤(zhòu)
(1)变性:模板(bǎn)DNA经加热至94℃左右并(bìng)保持(chí)一(yī)定时间后,基于DNA半(bàn)保留复制原(yuán)理,还(hái)有碱基互补配对原(yuán)则(zé),即(jí)复制的过(guò)程中(zhōng)双链DNA会解链,由双链(liàn)变成单链(liàn),为(wéi)下轮反应做准备;
(2)退(tuì)火(huǒ):模板DNA经加热变性成单链后,温(wēn)度降至55℃左右,引(yǐn)物与模(mó)板DNA单链的(de)互补序列配对(duì)结合;
(3)延伸:温度(dù)再(zài)升至72℃左右,在DNA聚合酶(méi)的作用下,把游离(lí)的dNTP按照碱基互补配对原则结合到单(dān)链(liàn)上,形成一条由旧链和新链杂合成的新的双链(liàn)DNA。
PCR扩增原理:变形-退(tuì)火-延伸温度(dù)循环(huán)
理(lǐ)论上,经过上面步骤,目标DNA浓(nóng)度可增加一(yī)倍。重(chóng)复循环上述过程,可获得更多的(de)“半(bàn)保留复制链”,而形成的新链又可成为下(xià)次循环的模(mó)板。每完成一个循环需2~4分钟, 仅需(xū)2~3小时就能将目标DNA扩增(zēng)放大几百万(wàn)倍。
全自动核酸提纯及实时(shí)荧(yíng)光PCR分析系(xì)统
经过以(yǐ)上分析,我(wǒ)们(men)就可以理解(jiě)为什(shí)么核酸检(jiǎn)测结果(guǒ)最快能(néng)在(zài)几个小时内出结果(guǒ)。
实(shí)时荧光PCR定量分(fèn)析
PCR扩(kuò)增仪温度(dù)控制(zhì)指(zhǐ)标主要有(yǒu):温度的准确性(xìng)、均(jun1)匀性、以及(jí)升降温速度。
1. 温(wēn)度(dù)的准确性:是(shì)指样品孔温度与设定温度的一致性,它(tā)直接关系到实验的(de)成败。因而对PCR扩(kuò)增仪(yí)而言温(wēn)度控制就意味着产品质量。
2. 温度的均匀性:是指样品(pǐn)孔(kǒng)间的(de)温度差异,它关(guān)系到在不同样品孔进行(háng)反应(yīng)结果的一致性。
3. 升降温速度:更快的升(shēng)降温速度(dù),可以(yǐ)有效缩短反应时间和可能(néng)的(de)非(fēi)特异性结合(hé)、反应的时(shí)间,从而(ér)提(tí)高PCR反应特异性。
相较于传统的相对(duì)稳定耐用的(de)机械式,新的半导(dǎo)体(tǐ)温控技术——TEC温度控制技(jì)术(shù)具(jù)有升降温更快速的优势,已经(jīng)成为PCR扩(kuò)增仪的首选温(wēn)度控制技术。
半导体制冷器 (Thermo Electric Cooler,简称 TEC) 是利用半(bàn)导体材料的(de)帕尔贴效应制(zhì)成的(de)。如图下所示,帕尔帖效应是指当直流电流(liú)通(tōng)过两种半导(dǎo)体材(cái)料(liào)组成的电偶时,其一端吸热,一端放热的现(xiàn)象。TEC 包括一些 P 型和 N 型对(组),它(tā)们通过电极连(lián)在一起(qǐ),并且夹在两个陶瓷电极之间,当有电流从 TEC 流过时,电流产生(shēng)的热(rè)量会从 TEC 的 一侧传到另一侧,在 TEC 上产(chǎn)生″热″侧和″冷″侧,这(zhè)就(jiù)是 TEC 的加(jiā)热与(yǔ)致冷原理。
帕(pà)尔帖效应,PN 节以及热流(liú)动示意(yì)图
PCR扩增仪一(yī)般具有两种温控模式,即模块温控模式(Block-control)和反(fǎn)应管温控模式(shì)(tube-control)。管内样品的温(wēn)度(dù)无法与温控模(mó)块同时达到预设温度(dù),特别是PCR反应中(zhōng)的孵育过程一般为30秒或更短(duǎn),如(rú)果采用只(zhī)有模块温控模式的话,反应混合物孵(fū)育的时间与程序设(shè)定(dìng)的(de)时(shí)间会有相(xiàng)当大的差距(jù)。为了(le)达(dá)到反应管(guǎn)内部(bù)温度精确控制,需采用反应管控制模(mó)模式,通过温度控制算法进行参数标定和补偿,确保反应混合物按照程序(xù)设(shè)定的时间维(wéi)持预设温度。
科技战“疫(yì)”,米兰网页版和数明在行动
面对近期香港、深圳、上海等(děng)地奥密克戎的(de)快速扩散,核酸检测能力在(zài)数量(liàng)和速度方面都面临着极(jí)大的考验。米兰网页版和数明(míng)半导体积极发挥了科技技(jì)术方面的优势,组织技术专(zhuān)家(jiā)研究PCR扩增技术的(de)优(yōu)化(huà)解决方(fāng)案,以功率(lǜ)器件门极驱(qū)动芯片和TEC控制器为着力点,优先保障(zhàng)芯片供应和交付,与客户一起助力抗疫,共(gòng)克时艰(jiān)。
米兰网页版和数明半导体自(zì)研的20V-600V耐压全系列的低边、半桥、三(sān)相半(bàn)桥等功率管门极驱动芯片(SLM2103S、SLM2136等)可用于驱动TEC,协助PCR扩增仪器客户快(kuài)速(sù)、方便地完成系统设计,在当前(qián)半导体供应短缺时期,可以满足客户设计方案的快速变更、验证与量产。
600V耐压半(bàn)桥功率器件驱动(dòng)芯片工(gōng)作(zuò)示意图
600V耐(nài)压三相(xiàng)半桥功率器件(jiàn)驱(qū)动芯片工作示意图
米兰网页版和数明半导体的单芯片TEC控制器产品——SLM8833/8834/8835 集成了TEC驱动电(diàn)路、低温(wēn)飘(piāo)高精度温(wēn)度误差放大器及环路补偿电路、温度设定与传感电路,采用高效的单电(diàn)感架构(gòu),实(shí)现更紧(jǐn)凑、更高的转(zhuǎn)换效(xiào)率及(jí)更低的噪声;其中功率级(jí)集成了(le)超低阻(zǔ)抗的MOSFET,损(sǔn)耗更低寿命更久;同时匹配模拟PID与数字PID两种(zhǒng)温(wēn)控(kòng)模式(shì),以满足客户PCR扩(kuò)增仪的(de)小型化创(chuàng)新设计需求。
由SLM8834 构成的 TEC 系统框图
模拟PID温控器模式
数字PID温控模(mó)式